Cromatografie clasică pe coloană
2. coloană cromatografică (tip de rotație)
3. coloana cromatografică (manual)
*** Lista de prețuri pentru întregul mai sus, întrebați -ne să obținem
Descriere
Parametrii tehnici
Cromatografie clasică pe coloanăeste o tehnică de separare fundamentală utilizată pe scară largă în chimie și biochimie pentru purificarea și izolarea componentelor de amestecuri . funcționează pe principiul partiționării diferențiale a substanțelor între o fază staționară ambalată într -o coloană și o fază mobilă care curge prin aceasta .}
The stationary phase, typically a solid adsorbent like silica gel or alumina, is tightly packed into a glass or plastic column. The sample mixture is introduced at the top of the column, followed by the addition of the mobile phase-a solvent or mixture of solvents. As the mobile phase percolates down the column, components of the mixture interact differently with the stationary phase based on Proprietățile lor chimice, cum ar fi polaritatea, dimensiunea și afinitatea pentru adsorbent .
Compușii cu interacțiuni mai puternice cu faza staționară se deplasează mai lent prin coloană, în timp ce cei cu interacțiuni mai slabe călătoresc mai repede . Această migrație diferențială are ca rezultat separarea amestecului în benzi sau fracții distincte, care pot fi colectate individual .
It is valued for its simplicity, versatility, and cost-effectiveness. It is suitable for both analytical-scale separations, to identify and quantify components, and preparative-scale separations, to obtain larger quantities of purified substances. Despite the advent of more advanced techniques like HPLC, it remains a staple in many laboratories due to its accessibility and effectiveness for a Gama largă de aplicații .
Parametri
Principiile de bază
|
|
Cromatografie clasică pe coloană, cunoscută și sub denumirea de cromatografie lichid-solid, este o tehnică de separare a solutelor bazate pe diferența de distribuție între o fază staționară (de obicei un adsorbant solid) și o fază mobilă (solvent) . Principiul de bază poate fi rezumat după cum urmează: cu ajutorul fazei fixe, solutul soluției este adsorbit în funcție de componentele mixtei în continuare, este adsorbit în funcție de componente care utilizează componentele mixturi Coeficienții de distribuție diferiți între faza fixă și faza mobilă . In column chromatography, the stationary phase is usually composed of porous particulate matter (such as silica gel, alumina, activated carbon, etc.), which has a large specific surface area and adsorption center, and can form hydrogen bonds with solute molecules, van der Waals forces and other interactions, resulting in adsorption. The mobile phase is responsible for elution of solute Molecule din faza staționară și selecția sa ar trebui determinate în funcție de polaritatea solutului și a caracteristicilor de adsorbție ale adsorbentului . În procesul de separare, soluția de amestec este introdusă în coloana care conține faza staționară . Cu fluxul fazei mobile, componentele se deplasează în jos pe coloană la viteze diferite, datorită capacității de adsorbție diferite a fazei staționare ., componentele mai polare sunt de obicei ușor de adsorbite de faza staționară, astfel încât să se deplaseze lent {{2 Polaritatea este ușor îndepărtată de faza mobilă, iar viteza de mișcare este mai rapidă . În acest fel, fiecare componentă formează un număr de benzi de culoare pe coloană pentru a obține separarea . |
Analiza aminoacizilor
Analiza aminoacizilor este de obicei efectuată folosind cromatografie lichidă, dintre careCromatografie clasică pe coloanăis a commonly used technique. In this method, ion exchange resin is used as stationary phase to separate amino acids according to the difference of electric charge. Amino acids may need to be converted to a more detectable form by derivatization before the sample enters the column. Derivatization can improve the separation effect and detection sensitivity of amino acids on chromatographic coloana .
- Pregătirea eșantionului: Proba de proteine este hidrolizată la aminoacizi . Acest lucru poate fi obținut prin hidroliză acidă sau hidroliză enzimatică . Eșantionul hidrolizat trebuie să sufere pre-tratament adecvat, cum ar fi îndepărtarea reziduurilor de proteine .}} adecvate
- Derivatizare: Pentru a îmbunătăți sensibilitatea caracteristicilor de detectare și separare a analizei de aminoacizi, derivatizarea aminoacizilor este adesea necesară . Există două tipuri de derivate de aminoacizi: derivații pre -coloane și derivații post -coloane . derivate în mod obișnuit pre -coloană includ delenalen -fenilen delidehyde (OPA), metil -clorofloflorofloren (Fmoc-ci), fenil izotiocianat (pitc), clorură de dansil (dansyl-ci), 2, 4- dinitrofluorobenzene (fdnb), etc. .
- Selecție de coloană: Selectați coloana potrivită pentru analiza aminoacizilor, cum ar fi coloana de schimb de ioni, coloana C18, coloana C8, etc. .
- Setarea condițiilor cromatografice: Setați condițiile cromatografice corespunzătoare, inclusiv faza mobilă, debitul, programul de gradient, etc. . Fazele mobile comune includ tampoane care conțin perechi de ioni, cum ar fi tampoane formate .
- Analiza eșantionului: Eșantionul după hidroliză și derivatizare este injectat în cromatograf pentru analiză . prin compararea zonei de vârf și concentrația fiecărui aminoacid din eșantion pe curba standard, conținutul de aminoacizi din eșantion poate fi analizat cantitativ .
- Prelucrarea datelor: Conform zonei de vârf și a datelor de concentrare obținute din analiză, conținutul fiecărui aminoacid din eșantion este calculat, iar datele sunt procesate și rezultatul este raportat .
Există multe exemple de aplicație în analiza aminoacizilor și mai multe cazuri specifice sunt enumerate mai jos:
- Detectarea aminoacizilor esențiali: utilizarea poate detecta conținutul de aminoacizi esențiali, cum ar fi izoleucina, leucina, lizina, etc. . acești aminoacizi joacă un rol vital în corpul uman și sunt importanți pentru menținerea activității vitale și a sănătății .
- Determinarea aminoacizilor în medicina chineză: în analiza medicinei chineze, este, de asemenea, utilizată pe scară largă pentru a determina conținutul aminoacizilor în medicina chineză ., de exemplu, atunci când determină conținutul de paeoniflorin în pastilele Wuji Baifeng, o coloană cu octadecilsilan silical legat de separat, deoarece umplutura poate fi utilizată pentru analiză și, de asemenea acizi .
- Determinarea aminoacizilor în alimente: Conținutul de aminoacizi în alimente este, de asemenea, una dintre zonele importante de aplicare . De exemplu, în determinarea nucleotidelor în produse alimentare și produse lactate pentru sugari, cinci nucleotide în pulbere de lapte pot fi izolate și determinate folosind o C 18- tw tw therged-fase, în același moment De asemenea, să fie utilizat pentru a determina conținutul de aminoacizi din alte alimente, ceea ce oferă o bază importantă pentru controlul calității alimentelor și evaluarea nutriției .
În analiza aminoacizilor, este necesar să se selecteze reactivi de derivatizare adecvați și condiții de derivatizare pentru a îmbunătăți sensibilitatea și precizia detectării .
Alegerea coloanei și setarea condițiilor cromatografice au un impact important asupra efectului de separare și trebuie optimizate în funcție de eșantionul specific și nevoile analitice .
În procesul de analiză, este necesar să acordați atenție condițiilor de pregătire și stocare a eșantioanelor pentru a evita influența contaminării și degradării eșantionului asupra rezultatelor analizei .
Ce este tratamentul derivat
Derivatizarea este o tehnică importantă de pretratare a eșantionului înCromatografie clasică pe coloană, care are ca scop îmbunătățirea performanței de detectare și a efectului de separare a analitelor . Următoarea este o explicație detaliată a procesului de derivatizare:
|
► Scopul tratamentului derivat 1) Performanța de detectare îmbunătățită: prin introducerea grupurilor funcționale ușor de detectat, analitul generează un semnal mai puternic pe detector, îmbunătățind sensibilitatea și precizia detectării . |
|
|
|
► Tipul de tratament derivat 1) Derivarea pre-coloană: |
|
Derivarea post-coloană are avantajele unei bune reproductibilitate și a factorilor mai puțin influențați, dar necesită instrumente și echipamente suplimentare . 1) Sensibilitate îmbunătățită de detectare: de exemplu, în analiza aminoacizilor, introducerea grupurilor funcționale ușor detectabile (cum ar fi fluoroforii) prin derivatizarea pre-coloană poate crește rezistența semnalului aminoacizilor pe detector, îmbunătățind astfel sensibilitatea detectării . |
|
Cromatografie clasică pe coloană, o tehnică fundamentală în știința separației, continuă să evolueze cu progrese în materiale și metodologie, asigurându -și relevanța atât în aplicații de cercetare, cât și în aplicații industriale .
O direcție promițătoare este integrarea noilor faze staționare . Inovațiile în știința materialelor au dus la dezvoltarea de materiale de ambalare de înaltă performanță, cu selectivitate, stabilitate și eficiență îmbunătățite . aceste materiale permit o rezoluție mai bună și separații mai rapide, satisfacerea cererii în creștere pentru analiza de înaltă creștere în industrii, cum ar fi fasticale, pentru a face față cererii în creștere {
Mai mult, se combină din ce în ce mai mult cu tehnici avansate de detectare, cum ar fi spectrometria de masă, pentru a îmbunătăți sensibilitatea și precizia . Această hibridizare permite o analiză mai cuprinzătoare a amestecurilor complexe, extinderea aplicabilității tehnicii în domenii precum Metabolomics și Proteomics .
În concluzie, viitorul constă în adaptarea sa la materiale noi, miniaturizare și integrare cu metode de detectare de ultimă oră, asigurându-și utilitatea continuă în peisaje științifice și industriale moderne .
Tag-uri populare: Cromatografie de coloană clasică, producători de cromatografie din coloană clasică din China, furnizori, fabrică
O pereche de
Cromatografie convențională pe coloanăUrmătoarea
Cromatografie pe coloană de oxid de aluminiuTrimite anchetă
