Cromatografie convențională pe coloană
2. Coloana Chromatografică (tip de rotație)
3. Coloana Chromatografică (manual)
*** Lista de prețuri pentru întregul mai sus, întrebați -ne să obținem
Descriere
Parametrii tehnici
Cromatografie convențională pe coloanăUtilizează diferența de raporturi de distribuție ale diferitelor substanțe între faza staționară și faza mobilă sau diferitele capacități de retenție ale fazelor fixe în raport cu substanțele diferite, pentru a obține separarea substanțelor. Când amestecul curge prin coloana cromatografică cu faza mobilă, acesta va interacționa cu faza staționară din coloană (cum ar fi dizolvarea, adsorbția etc.). Datorită diferențelor de proprietăți și structuri fizice și chimice ale fiecărei componente din amestec, mărimea și rezistența interacțiunilor lor cu faza staționară variază, de asemenea,. Sub aceeași forță motrice, timpul de retenție al fiecărei componente din faza staționare este diferit, astfel încât componentele din amestec să curgă din coloană într -o anumită ordine, obținând separarea.
Parametru
Detectarea reziduurilor de pesticide
 |
 |
 |
 |
Spunem adesea astaCromatografie convențională pe coloanăeste de fapt separarea cromatografiei pe coloană, cunoscută și sub denumirea de cromatografie pe coloană. A fost inventat și folosit pentru prima dată de oamenii de știință ruși în 1903. A zdrobit o soluție de pigmenți ai plantelor în pulbere de carbonat de calciu și a găsit diferite benzi de culori pe pulberea de carbonat de calciu de sus în jos. Prin separarea și extragerea diferitelor benzi de culori, s -au obținut clorofilă relativ pură, luteină etc.
După o sută de ani de dezvoltare, această metodă a devenit relativ matură, iar faza staționară a evoluat, de asemenea, de la o singură pulbere de carbonat de calciu la alumină (care poate fi împărțită în acid, neutru, alcalin), silicagel, carbon activ, etc. Printre ele, silica -gelul este cel mai frecvent utilizat în laboratoarele majore, în general, împărțite în fază normală silice și silical de fază inversă!
Faza staționară (silicagel) trebuie, în general, să fie purificată și activată, iar dimensiunea particulelor ar trebui să fie uniformă. În teorie, cu cât dimensiunea particulelor este mai mică și cu cât este mai mare suprafața pe unitatea de masă, cu atât este mai mare capacitatea de adsorbție și cu atât este mai bun efectul de separare.
Cu toate acestea, în utilizare practică, atunci când particulele de fază fixă sunt prea mici, există adesea două situații: una este că sunt mai ușoare în greutate și plutesc ușor în aer (silicagelul nu poate fi degradat de corpul uman, iar cu cât este mai fine, cu atât este mai toxic); În al doilea rând, particulele mici pot duce, de asemenea, la lacune mici între particule, rezultând un debit lent de solvent și consumul de timp; Luând ca exemplu siliconul, cea mai mare dimensiune utilizată în comerț de silicon este în prezent 200-300.
În ceea ce privește metodele de trecere a coloanelor, pe lângă echipamentele de analiză automată, cum ar fi prepararea circulației înainte, prepararea eficientă a fazei lichide și mașinile de trecere a coloanei menționate anterior, trecerea manuală a coloanei este împărțită în principal în trei tipuri: trecerea coloanei de presiune atmosferică, trecerea coloanei depresurizării și trecerea coloanei de presurizare.
Printre ele, depresurizarea prin coloană are ca rezultat o eficiență slabă a adsorbției datorită debitului rapid al eluenului, ceea ce duce la pierderea majorității numărului de tăvi și a eficienței slabe de separare. Este potrivit pentru separarea eșantioanelor cu plăci TLC relativ deschise, în special pentru eșantioane cu o singură impuritate polară mare în produs; Cea mai mare parte a timpului său este petrecut pentru pre-tratamentul compușilor, eliminând unele impurități înainte de o purificare atentă. Trebuie menționat că evaporarea solventului cauzată de presiunea negativă în timpul utilizării poate duce la condensarea unui număr mare de picături de apă pe suprafața exterioară a coloanei. Compușii sensibili la apă nu trebuie încercați cu ușurință.
Trecerea coloanei de presiune atmosferică este cea mai eficientă metodă de separare între cele trei, dar deoarece solventul se mișcă adesea prea lent, chiar și cel mai bun efect de separare poate afecta eficiența. Prin urmare, în acest moment se aplică presiunea, care se numește trecerea coloanei sub presiune; Dar presiunea nu ar trebui să fie prea mare. În general, o bilă cu lanț dublu este utilizată pentru funcționarea manuală, iar o pompă de pește este utilizată pentru funcționarea automată. Ambele pot fi modificate așa cum se arată în imagine.
Proces convențional de trecere a coloanelor:
Lucrările de pregătire trebuie făcute bine:
Când selectați o coloană, observați dacă există o placă de șlefuire. Pentru coloane fără scânduri de șlefuire, nu uitați să umpleți fundul cu niște bumbac. Bumbacul nu trebuie să fie prea gros sau prea subțire, atât timp cât poate bloca siliconul să se desprindă. (Bloggerul a demontat direct un cuier de haine și l -a folosit pentru a insera bumbacul în priza de pe dop)
Pregătiți eluantul de polaritate minim, lampa UV (recomandată pentru personalul de laborator, portabil, gata să facă o fotografie în orice moment), echipamente de presiune și suport pentru tuburi de testare, după caz!
Selectați o coloană adecvată, adăugați gel de silicon, înmuiați gelul de silicon și aplatizați -l
SelecțiaCromatografie convențională pe coloanăeste foarte important, iar dimensiunea lor ar trebui calculată pe baza cantității de produs, care poate fi, în general, împărțită în:
Câteva miligrame de coloană (alegerea finală pentru sinteza totală);
O coloană de mai multe zeci de miligrame (substrat de expansiune metodologică);
500 miligrame până la 1 gram de coloană (folosind metodologie ca materie primă);
Stâlpi în jurul valorii de 5g și scale mai mari.
Cel mai frecvent raport dintre diametrul coloanei și înălțimea în laborator este, în general, între 1: 2,5 și 1:15. Cantitatea de silicagel utilizat ca fază staționară în timpul încărcării eșantionului este de aproximativ 20 până la 40 de ori mai mare decât cea a eșantionului. Standardul pentru selectarea coloanelor ar trebui să se bazeze pe situația de urcare a plăcilor TLC a eșantionului. Dacă există multe impurități în apropiere, încercați să alegeți o coloană mai mare cât mai mult posibil, astfel încât eșantionul dvs. să poată fi acoperit cu un strat subțire mic (grosime recomandată sub 5 mm). Dacă impuritățile sunt departe, această grosime poate fi crescută în mod natural, dar nu se recomandă ca grosimea eșantionului dvs. să depășească 2 cm, cu excepția cazului în care produsul este pur și simplu spălat.
Mulți oameni fac o greșeală de a crede că adăugarea mai multor silicon, chiar dacă este mai groasă pe eșantionul meu, poate fi separat bine? Acest răspuns este negativ!
Motivul este că acești oameni nu au crezut niciodată că eșantioanele de mai jos și de mai sus nu rulau pe aceeași linie, așa că nu puteau obține decât unele curari, majoritatea fiind traversate, ca să nu mai vorbim de cele impure, pierzând timpul și solvenții!
De aceea, eșantionul necesită subțierea!
După selectarea coloanei, adăugarea de silicon se poate face printr -o pâlnie de hrănire. În același timp, asigurați -vă că purtați o mască și funcționați într -o capotă de fum. Motivul pentru aceasta nu va fi elaborat de blogger (silicoză).
În ceea ce privește infiltrarea silicagelului, procesul recomandat este: În primul rând, așezați coloana de silicagel cu gelul de silicală instalat vertical, aplatizați suprafața gelului de silicagel cu mâna, conectați partea inferioară a coloanei de silicagel la o pompă de apă, pompați silicagelul și apoi turnați în eluatul cel mai puțin polu de sus. Când eluantul este pe cale să se scurgă, închideți supapa de închidere pentru a împiedica pomparea solventului în pompa de apă.
Apoi, sub presiune, gelul de silicon poate fi înmuiat uniform prin spălarea a șapte sau opt volume de coloană cu cea mai mică cantitate de agent în curs de dezvoltare.
Eșantion de mai sus
Eșantionarea este împărțită în eșantionare umedă și eșantionare uscată.
(1) Eșantionare umedă.
Metoda recomandată este de a utiliza o pipetă cu un vârf de cauciuc pentru a aspira proba, aproape de secțiunea superioară a gelului de silicon, picurați încet și uniform proba până când acoperă un strat, apoi încetați să adăugați proba și să aplicați o anumită presiune pentru a cufunda substanța uleioasă în stratul de gel de silicon; Scufundați substanța uleioasă în stratul de silicon și repetați acest proces de mai multe ori până când toate probele sunt încărcate!
Unii studenți noi pot fi curioși de ce se realizează această operație în loc să acopere uleiul de proces umed, precum substanța, toate simultan?
De fapt, această operație poate reduce înălțimea efectivă a stratului de eșantion. În acest moment, cromatografia pe coloană a început deja, iar eșantioanele ulterioare sunt ca solvenții care împing probele anterioare la adsorb și desorb în silicagel.
(2) În ceea ce privește eșantionarea uscată.
Cu excepția cazului în care este absolut necesar, nu este recomandat. Probele solide sunt mai recomandate să fie bătute sau cristalizate. Sunt recomandate „metode lipsite de scrupule, acetat de etil vs. apă, cristalizarea asistată de oscilație cu ultrasunete a uleiului de fierbere ridicat” și „împărtășirea unei metode de recristalizare de laborator”.
Eșantionarea uscată aduce în general două probleme; Pe de o parte, în timpul procesului de amestecare a eșantionului, posibilitatea de reacție între eșantion și silicagel crește din cauza necesității de a ridica temperatura pentru evaporarea rotativă; Pe de altă parte, încărcarea uscată înseamnă că adsorbanții vor fi introduși în stratul de probă, crescând înălțimea stratului de eșantion sau dimensiunea coloanei, necesitând mai mult timp și mai mult solvent.
Dacă nu există altă opțiune, pur și simplu turnați pulberea adsorbită lent în coloană pentru încărcare, cu unele cerințe similare cu metodele umede.
Adăugați sulfat de sodiu anhidru sau nisip de cuarț
Pentru a evita afectarea stratului de probă în timpul adăugării eluantului, provocând inegaz, deformare și afectarea eficienței de separare, un strat de sulfat de sodiu anhidru sau nisip de cuarț este, în general, așezat în partea de sus a stratului de probă.
Inginerii noștri preferă personal să depună sulfat de sodiu anhidru, deoarece are, de asemenea, o funcție de uscare și este prietenos cu solvenții precum diclorometanul, care sunt predispuse la volatilizare, absorbție de căldură și condensare!
Eluarea gradientului, eșantionarea și colectarea
După încărcare, clătiți mai întâi coloana cu un solvent polar mic (un solvent care nu va permite ca produsul să treacă) pentru volumele de coloană 2-3 (un volum de coloană este definit ca volumul fazei mobile care curge și în afară) pentru a asigura uniformitatea, apoi selectați o proporție pentru eluare.
Cum să alegeți eluantul care trece prin coloană?
Raportul eluant este raportul când produsul dvs. atinge o valoare RF de aproximativ 0. 2 pe placa TLC
Aceasta este experiența spălării coloanelor pe care am citit -o multe cărți și împărtășite, iar procesul propriu -zis este, de asemenea, foarte similar. Personal, prefer să reduc gradientul de două ori.
De exemplu, dacă solventul pentru urcarea plăcilor TLC este PE/ea =2: 1, bloggerul este mai probabil să înceapă eluția gradientului de la PE/ea =4: 1 și să se încheie la PE/ea =2: 1, rezultând în general rezultate mai bune.
Există, de asemenea, tehnici la colectarea eluantului. Mai întâi puteți alege o eprubetă mai mare pentru a -l primi, iar atunci când TLC se apropie de punctul țintă, treceți la o eprubetă mai mică. Acest lucru poate reduce posibilitatea de a primi mai mult și de a evita impuritățile.
Dacă întâlniți situații în care punctele de impuritate și punctele de produs sunt strânse, în special cele cu fluorescență slabă, nu uitați să nu aplicați presiune. În schimb, alegeți să treceți coloana sub presiune normală și schimbați tubul de fiecare dată când sunt conectate jumătate sau mai puțin tuburi, ceea ce poate crește și probabilitatea de purificare.
Nu uitați să nu gestionați stâlpul în timp util!
Mulți oameni au obiceiul de a presupune că coloana a fost trecută și uscată atunci când nu există niciun produs într -unul sau două tuburi după TLC în etapa ulterioară.
Mi -am dat seama că randamentul era prea scăzut atunci când l -am calculat sau când am mers să fac un spectru, am descoperit că spectrul era incorect și rata punctul greșit. Am regretat profund.
Așadar, este recomandat să nu vă grăbiți să prelucrați coloana după finalizarea punctului dorit. În schimb, efectuați rezonanță magnetică nucleară pentru a se potrivi cu randamentul înainte de procesare.
Dacă sunteți ocupat sau vă grăbiți să purificați alți compuși cu acest lucruCromatografie convențională pe coloană, este recomandat să clătiți cu un solvent mixt benign de polaritate ridicată și să lăsați această parte a eluantului separat pentru rezultatele identificării.
Tag-uri populare: Cromatografie convențională de coloane, China Producători de cromatografie de coloane convenționale, furnizori, fabrică
O pereche de
Coloană de cromatografie micăUrmătoarea
Cromatografie clasică pe coloanăTrimite anchetă
